分光光度法测定叶绿素含量

分光光度法测定叶绿素含量

        一、实验目的
        1. 了解叶绿素在植物组织中的分布和性质。
         2、掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
         2、实验原理
        叶绿素广泛存在于水果、蔬菜等绿色植物组织中，与植物细胞中的蛋白质结合形成叶绿体。当植物细胞死亡时，会释放叶绿素。游离叶绿素极不稳定，对光热敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色脱镁叶绿素，可在稀碱液中水解成亮绿色的叶绿素酸盐以及植醇和甲醇。高等植物中的叶绿素有叶绿素a和叶绿素b两种，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
        测定叶绿素含量的方法很多，其中主要有：
         1、原子吸收光谱法：通过测定镁的含量，间接计算叶绿素的含量。
         2、分光光度法：用分光光度计测定叶绿素提取物在*大吸收波长处的吸光度，然后用朗伯-比尔定律计算提取物中各色素的含量。
        叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有*大吸收，两条吸收曲线在652nm处相交。因此，测定提取物在645nm、663nm、652nm波长处的吸光度值，可根据经验公式计算叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
        三。仪器、原料和试剂
        仪器：分光光度计、电子上装天平（灵敏度0.01g）、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦拭纸、滴管。
        材料：新鲜（或干燥）植物叶子
        试剂：1.96%乙醇（或80%丙酮）； 2.石英砂； 3、碳酸钙粉
        四。操作步骤
        取新鲜的植物叶子（或其他绿色组织）或干燥的材料，擦去组织表面的污垢，去除中脉并切成碎片。称取2 g新切样品，置于研钵中，加入少量石英砂、碳酸钙粉和3 mL 95%乙醇研磨成均质浆液，加入10 mL乙醇，继续研磨直到组织变白。静置 3 到 5 分钟。
        取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇润湿，沿玻璃棒将提取液倒入漏斗中，滤液流入100mL棕色容量瓶；用少量乙醇冲洗研钵、研杵和残留物数次，*后一起将残留物一起倒入漏斗中。
        用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直到滤纸中没有绿色和残留物。*后使用将乙醇稀释至 100mL 并充分摇匀。
        取叶绿体色素提取物在665nm、645nm和652nm波长处测定吸光度，以95%乙醇为空白对照。
        五。计算
        根据实验原理中提供的经验公式计算植物材料中叶绿素a、b和总叶绿素的含量